親水色譜柱是一種專門設計用于分離親水性和極性化合物的色譜柱。利用固定相上的親水性基團與樣品中的極性基團之間的相互作用,實現(xiàn)對極性化合物的有效分離。其工作原理基于親水作用和可能的離子交換作用。在分離過程中,水相固定相上的親水性基團與待分離物質(zhì)中的極性基團發(fā)生相互作用,從而實現(xiàn)物質(zhì)的分離和純化。
1、選擇合適的流動相
選擇合適溶劑:流動相應選用色譜純試劑、高純水或雙蒸水。酸堿液及緩沖液需經(jīng)過濾后使用,以防止雜質(zhì)影響分析結果。
更換頻率:水相流動相需經(jīng)常更換(一般不超過2天),防止長菌變質(zhì)。
2、樣品處理
樣品過濾:采用過濾或離心方法處理樣品,確保樣品中不含固體顆粒。
樣品溶解:用流動相或比流動相弱(若為反相柱,則極性比流動相大;若為正相柱,則極性比流動相?。┑娜軇┲苽錁悠啡芤?。
3、色譜柱操作
保護柱使用:使用保護柱可以延長分析柱的使用壽命。
沖洗步驟:如所用流動相為含鹽流動相,反相色譜柱使用后,先用水或低濃度甲醇水(如5%甲醇水溶液),再用甲醇沖洗。
4、設備操作規(guī)程
開機步驟:打開所有電源,待自檢通過;在計算機中雙擊LC SOLUTION Lite圖標,進入工作站。
設置儀器方法:主要為LC采集時間、泵總流速及各泵流速、檢測器波長、柱溫箱溫度等;設置完成后,另存方法文件,并下載至設備。
基線平穩(wěn):點擊圖標(儀器開/關),系統(tǒng)開始運行,觀察檢測器基線變化,如果基線平直穩(wěn)定不變,即認為接近平衡,可以調(diào)零等待。
進樣分析:點擊單次運行,編輯樣品參數(shù)(樣品名,方法文件名,數(shù)據(jù)存儲路徑—數(shù)據(jù)文件名,進樣量等),點擊確定后,樣品進樣。
數(shù)據(jù)處理:文件---打開數(shù)據(jù)文件---視圖---峰表,則可以查看保留時間,峰高,峰面積等,之后用Excel做標準曲線,根據(jù)未知樣品的峰面積求濃度。
關機步驟:分析結束后,更換洗液清洗流路系統(tǒng)(如用緩沖液,先用水清洗半小時),再有機溶劑清洗30分鐘以上,最后用有機溶劑封存;停止系統(tǒng)運行,在實時分析工作站中,點儀器開/關鍵即停止所有單元工作;退出實時分析界面,再完q退出;關閉單元電源開關。